液相色譜儀的安裝使用說明
液相色譜儀作為實驗室常用的分析儀器,正確的安裝與使用方法對于獲得準確可靠的實驗數(shù)據(jù)、延長儀器使用壽命至關重要。
安裝前準備
場地選擇:液相色譜儀應安裝在水平、穩(wěn)固的實驗臺上,臺面需能承受儀器及相關配件的重量。儀器周圍要預留足夠空間,方便操作、維護以及通風散熱,距離墻面至少 15 - 20 厘米。同時,要避免將儀器放置在陽光直射、高溫、高濕或有強磁場、腐蝕性氣體的環(huán)境中,理想的環(huán)境溫度為 20 - 25℃,相對濕度在 40% - 65%。
試劑準備:流動相必須使用 HPLC 級別的試劑,確保分析結果的準確性。根據(jù)實驗需求,精確配制不同比例的水相和有機相混合流動相。若流動相含有無機鹽、表面活性劑等固體溶質,建議采用加熱法溶解,避免使用振搖、超聲等方式,以防溶質處于 “臨界膠團濃度",后續(xù)遇有機溶劑或溫度劇降時析出結晶,損傷儀器和色譜柱。配制好的流動相需進行過濾與脫氣處理。過濾可使用 0.45μm 或 0.2μm 的混合型過濾膜,以去除顆粒雜質;脫氣方法多樣,如吹氦脫氣法,在 0.1MPa 壓力下,以約 60mL/min 流速向流動相儲液容器中通入氦氣 10 - 15min,能有效排除約 80% 的氧氣,但成本較高;加熱回流法脫氣效果好,但要注意冷凝塔冷卻效率,防止溶劑丟失和混合比例變化;抽真空脫氣法可降壓至 0.05 - 0.07MPa 除去溶解氣體,但可能改變混合溶劑組成,多用于單溶劑體系;超聲波脫氣法將流動相置于超聲波清洗器中震蕩 10 - 20min,效果相對較差;在線脫氣法使用簡單、低故障且有效,建議購買儀器時配備在線脫氣機。
儀器檢查:在安裝前,仔細檢查液相色譜儀各部件是否齊全、有無損壞,如泵、進樣器、檢測器、柱溫箱、色譜柱等。檢查儀器的電源線、數(shù)據(jù)線、管路連接頭等是否完好無損,確保儀器在運輸過程中未受到物理損傷。同時,確認隨機附帶的說明書、保修卡、配件清單等資料是否完整。
安裝步驟
硬件安裝:按照儀器說明書,將液相色譜儀的各個部件依次安裝在實驗臺上。首先安裝泵,確保泵體水平放置,固定牢固,連接好電源線和輸液管路。然后安裝進樣器,將其與泵的輸出管路連接緊密,注意接口處的密封,防止漏液。接著安裝柱溫箱,將色譜柱正確安裝在柱溫箱內,連接好柱前和柱后的管路,確保流動相能順暢通過色譜柱。最后安裝檢測器,根據(jù)檢測器類型(如紫外檢測器、熒光檢測器等),連接好相應的信號線和流動相管路。在連接所有管路時,要注意管路的走向,避免管路扭曲、打折,確保流動相流通順暢。
色譜柱安裝:安裝色譜柱時,先確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內貯存的溶劑。擰下柱兩頭的密封堵頭,按柱管上標明的流動相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口連接,柱的出口與檢測器連接。連接管一般為外徑 1.57mm、內徑 0.1 - 0.3mm 的不銹鋼管,兩頭配有空心螺釘及密封用壓環(huán)。連接時,將連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底,然后順時針擰緊空心螺釘,直至擰不動,再用扳手順時針擰 1/4 - 1/2 圈。若色譜柱加壓后有漏液現(xiàn)象,用扳手再順時針擰 1/4 圈,直至不漏液。安裝過程中要注意避免碰撞色譜柱,防止柱內填料受損。同時,確保接頭與柱頭深度匹配,若接頭比柱頭深,可能導致漏液;若柱頭比接頭深,則會產(chǎn)生死體積,使譜帶展寬和峰拖尾。此外,若新色譜柱內貯存的溶劑與流動相不匹配,特別是當流動相含有緩沖鹽時,需進行溶劑轉換。例如,正相柱通常用正己烷保存,轉換到 HILIC 模式時,需使用二氯甲烷或乙酸乙酯作為過渡溶劑。
軟件安裝與連接:對于配備有控制軟件的液相色譜儀,按照軟件安裝指南,將軟件安裝在配套的計算機上。安裝完成后,通過數(shù)據(jù)線將儀器與計算機連接,打開儀器電源和計算機,運行軟件,進行儀器與軟件的通訊設置,確保兩者能夠正常通訊。在軟件中設置儀器的各項參數(shù),如泵的流速、進樣體積、檢測器波長、柱溫等初始參數(shù)。
使用方法
開機與初始化:打開液相色譜儀的各個部件電源,如泵、檢測器、柱溫箱等,等待儀器進行自檢和初始化。在自檢過程中,儀器會自動檢測各部件的工作狀態(tài),如泵的壓力、流量,檢測器的光路等。若自檢過程中出現(xiàn)故障提示,需根據(jù)提示信息排查故障,常見故障如泵頭漏液、管路堵塞、檢測器光源故障等。排除故障后,重新進行自檢,直至儀器初始化完成。
流動相平衡:在儀器初始化完成后,將配制好并經(jīng)過過濾、脫氣處理的流動相連接到泵的輸液管路上。開啟泵,以較低流速(如 0.2 - 0.5mL/min)沖洗系統(tǒng),排除管路中的氣泡。待氣泡基本排除后,逐漸將流速提升至實驗所需流速(一般內徑 4.6mm 的色譜柱,流速可選 1mL/min;內徑 4.0mm 柱,流速 0.8mL/min 為佳),對色譜柱和整個系統(tǒng)進行平衡。平衡時間根據(jù)實驗情況而定,一般需要 30 - 60 分鐘,直至基線穩(wěn)定。若流動相中含有表面活性劑,建議前一晚小流速過夜,第二天上班后將流速增至正常,再平衡 1 小時后開始實驗。在平衡過程中,密切關注泵的壓力變化和基線波動情況,若壓力過高或基線波動較大,可能存在管路堵塞、氣泡未排盡或流動相污染等問題,需及時排查解決。
樣品準備與進樣:將待測樣品用流動相溶解,確保樣品溶解且濃度在儀器檢測范圍內。若樣品中含有強極性或與柱填料發(fā)生不可逆吸附的雜質,需使用預處理柱進行去除。同時,使用 0.45μm 的過濾膜過濾樣品,去除微粒雜質,防止堵塞進樣器和色譜柱。對于手動進樣,用微量注射器吸取適量樣品,將注射器針頭插入進樣閥的進樣口,按照進樣閥的操作說明,切換進樣閥至進樣位置,將樣品注入系統(tǒng);對于自動進樣器,將處理好的樣品放置在自動進樣器的樣品盤中,在軟件中設置好進樣序列、進樣體積等參數(shù),自動進樣器會按照設定程序依次進樣。
運行分析:在進樣完成后,在軟件中設置好分析方法,包括流動相的梯度洗脫程序(若為梯度洗脫)、柱溫、檢測器波長、數(shù)據(jù)采集時間等參數(shù)。點擊運行按鈕,儀器開始按照設定的分析方法運行,樣品在色譜柱中分離后進入檢測器,檢測器將檢測到的信號轉化為電信號傳輸給計算機,軟件實時采集并記錄數(shù)據(jù),生成色譜圖。在分析過程中,觀察儀器的運行狀態(tài)和色譜圖的出峰情況,如保留時間、峰形、峰面積等。若出現(xiàn)異常情況,如峰形拖尾、分叉、保留時間漂移等,需分析原因并進行調整,可能原因包括色譜柱性能下降、流動相比例不準確、樣品污染等。
數(shù)據(jù)處理與結果分析:分析結束后,軟件會自動對采集到的數(shù)據(jù)進行處理,如積分、計算峰面積、保留時間等。根據(jù)實驗目的,對處理后的數(shù)據(jù)進行分析,與標準品的色譜圖對比,確定樣品中各組分的含量。在數(shù)據(jù)處理過程中,可根據(jù)實際情況調整積分參數(shù),如斜率、峰寬等,確保積分結果準確可靠。同時,對實驗數(shù)據(jù)進行記錄和保存,以便后續(xù)查閱和分析。
清洗與關機:實驗結束后,需要對儀器進行清洗。若流動相僅為乙腈 - 水或甲醇 - 水,繼續(xù)以 1.0mL/min 的流速沖洗色譜柱 30 分鐘,柱溫保持試驗時溫度。若流動相含有無機鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質,先采用純水(或含有 2% 甲醇)沖洗 A 管路(試驗采用哪個管路,就要沖洗該管路)30 分鐘,流速 1.0mL/min,柱溫可較試驗溫度高出 5 - 10℃;隨后更換成 20% 甲醇再沖洗 30 分鐘,流速 1.0mL/min,關閉柱溫箱加熱裝置。沖洗完成后,關閉泵、檢測器、柱溫箱等儀器部件的電源,關閉計算機和軟件。同時,清理實驗臺面,將流動相、樣品等試劑妥善保存,處理好實驗廢棄物。
正確安裝和規(guī)范使用液相色譜儀是獲得準確分析結果的基礎,操作人員需嚴格按照上述步驟和注意事項進行操作,并定期對儀器進行維護保養(yǎng),以確保儀器長期穩(wěn)定運行 。




