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《植物提取物抗氧化活性評價薄層色譜法》國家標(biāo)準(zhǔn)征求意見

2021-10-13 08:46:33 來源：儀表網(wǎng) 閱讀量：7915

　　根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會國家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計劃，由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口的《植物提取物抗氧化活性評價薄層色譜法》(計劃號：20205075-T-424)國家標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)已形成征求意見稿，按照《國家標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》的有關(guān)規(guī)定，現(xiàn)向社會各界公開征求意見。

　　抗氧化是抗衰老、抗疲勞、抗炎等生物活性的重要基礎(chǔ)。絕大部分以植物提取物為原料的功能食品都含有大量抗氧化活物質(zhì)，例如蘆丁、槲皮素、花青素、茶多酚等。目前，我國生產(chǎn)具有抗氧化功能產(chǎn)品(藥品、食品和保健品等)的規(guī)模以上企業(yè)多達(dá)2000多家，已經(jīng)形成了2300多億元的產(chǎn)業(yè)規(guī)模。這些產(chǎn)品的原料大部分來自農(nóng)業(yè)廢棄物。

　　目前，植物提取物中抗氧化活性評價方法主要根據(jù)受試對象分為體內(nèi)和體外二大類。體內(nèi)方法以丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱苷肽等為指標(biāo)，測定其含量來評價體內(nèi)抗氧化活性的高低。體外抗氧化評價體系則以自由基清除法、氧化還原法為主。但必須注意的是，這種抗氧化評價方法有一個固有的缺點(diǎn)：檢測選擇性差。更確切地說，當(dāng)樣品中含有兩種或者兩種以上的抗氧化活性物質(zhì)的時候，分析結(jié)果無法區(qū)分每一種物質(zhì)的抗氧化活性高低。而基于實驗動物模型的抗氧化評價方法時間長、成本高且誤差大，因此難以形成國家標(biāo)準(zhǔn)。

　　薄層色譜是近年來廣泛應(yīng)用到植物提取物分析的一項色譜分離技術(shù)。建立在薄層色譜和 DPPH 顯色反應(yīng)聯(lián)用基礎(chǔ)上的抗氧化分析方法兼?zhèn)溥x擇性高和通用性好的優(yōu)點(diǎn)。更重要的是，薄層色譜是目前能與生化反應(yīng)直接聯(lián)用的色譜工具。

　　目前可查詢到的關(guān)于薄層色譜技術(shù)的國家標(biāo)準(zhǔn)有兩項：《配合飼料中 T-2毒素的測定薄層色譜法》和《蜂蜜中高果糖淀粉糖漿測定方法薄層色譜法》。未查到將薄層色譜與生物傳感聯(lián)合用于植物提取物中功效成分活性評估的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn)。這一缺失，使得企業(yè)在利用植物廢棄物作為原料生產(chǎn)抗氧化功效產(chǎn)品及其質(zhì)量控制缺乏技術(shù)支撐，無標(biāo)準(zhǔn)可用。

　　因此，有必要盡快制定《植物提取物抗氧化活性評價薄層色譜法》國家標(biāo)準(zhǔn)，以滿足相關(guān)企業(yè)生產(chǎn)和品控的需要。

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了薄層色譜聯(lián)用 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)顯色反應(yīng)評估植物提取物抗氧化能力的方法(以槐米提取物為例，蘆丁為標(biāo)準(zhǔn))。

　　本標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容包括：范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑、儀器和設(shè)備、測定步驟、空白試驗、結(jié)果計算與表示、精密度和回收率、檢出限、檢驗報告等。

　　方法原理：

　　用硅膠薄層色譜對槐米提取物的甲醇溶液進(jìn)行展開，實現(xiàn)對其中多種抗氧化物質(zhì)的色譜分離，然后通過浸漬的方式將停留在硅膠薄層上的分離結(jié)果與 DPPH 顯色反應(yīng)相耦合，顯色反應(yīng)結(jié)果用光密度掃描儀定量檢測，檢測結(jié)果以蘆丁為內(nèi)標(biāo)加權(quán)定量計算評估槐米樣品綜合抗氧化能力。

　　儀器與設(shè)備：

　　1.實驗室常用玻璃器皿。2.分析天平：靈敏度0.0001g。3.渦旋混勻器。4.超聲清洗儀：超聲頻率 40～80 kHz。5.離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000 rpm。6.雙光束紫外-可見光分光光度計：檢測范圍 190-900 nm。7.薄層色譜工作站，包括：薄層點(diǎn)樣儀、薄層展開儀、自動浸漬器、光密度掃描儀。

　　檢測限和定量限：

　　使用合適濃度的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐漸減少點(diǎn)樣量，進(jìn)行薄層色譜-DPPH 顯色反應(yīng)，根據(jù)光密度掃描結(jié)果計算峰高與基線噪音高的比，S/N=3(S 為對照品峰高，N 為基線噪音高)時的對照品濃度為檢出限(LOD)，得到蘆丁的檢測限12ng/斑點(diǎn)，S/N=10 時的濃度為定量限(LOQ)，得到蘆丁的定量限39ng/斑點(diǎn)。

　　精密度和準(zhǔn)確度：

　　通過測定槐米提取物中蘆丁的添加回收率(分別進(jìn)行了 3 個添加水平試驗，50，100，150 mg/g，每個添加水平重復(fù) 3 次)對優(yōu)化得到的分離-檢測方法的精確度和準(zhǔn)確度進(jìn)行驗證。表 1 所示，方法的添加回收率為 82%-97%，精密度RSD<10%。這表明本標(biāo)準(zhǔn)所使用的提取方法和分離檢測手段具有良好的準(zhǔn)確度和精密度。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于同時評價植物性食品原料中多元抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

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