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食品添加劑糖化酶制劑的發(fā)酵制取

來源:   2006年09月11日 09:02   1843
本標(biāo)準(zhǔn)適用于由發(fā)酵法生產(chǎn),經(jīng)提純制取,供食品生產(chǎn)作添加劑用的糖化酶制劑。 

1、技術(shù)要求


1.1外觀:固體時,粉狀,無結(jié)塊。液體時,黃褐色,允許有少量凝集物。 

1.2項目和指標(biāo)表1 

項目 指標(biāo) 

固體 30000,40000,20000,30000 

液體 50000,60000,40000,50000 

酶活力,u/g(mL)80000,100000,60000,80000 

150000,200000, 

水分,%不小于8.0 

細(xì)度(通過40目銅網(wǎng)篩)%不小于80 

酶活力保存率(室溫,半年),%不小于80 

重金屬(以Pb計),%不超過0.004 

鉛,%不超過0.001 

砷(以As計),%不超過0.0003 

黃曲霉毒素B1,%不超過0.0000005 

大腸菌群,個/100g(ml)不超過30 

沙門氏菌不得檢出 

2、試驗方法 

2.1外觀:用目視判定。 

2.2酶活力測定 

2.2.1試劑 

2.2.1.10.1N乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH4.6):稱取6.7g乙酸鈉(CH3COONa·3H2O),吸取冰乙酸2.6mL,用蒸餾水溶解定容至1000mL,上述緩沖溶液應(yīng)以酸度計校正pH值。 

2.2.1.20.05N*溶液:按GB601《化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)溶液制備方法》中2.7執(zhí)行。 

2.2.1.30.1N碘液:按GB601《化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)溶液制備方法》中2.10執(zhí)行。 

2.2.1.40.1N氫氧化鈉溶液:按GB601《化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)溶液制備方法》中2.2執(zhí)行。 

2.2.1.52N硫酸溶液:量取分析純濃硫酸(比重1.84)5.6mL緩緩加入適量蒸餾水中,冷卻后用蒸餾水定容至100mL,搖勻。 

2.2.1.620%氫氧化鈉溶液:稱取20g分析純氫氧化鈉,用蒸餾水溶解定容至100mL。 

2.2.1.72%可溶性淀粉溶液:稱取可溶性淀粉2.00g,然后用少量蒸餾水調(diào)勻,徐徐傾入已沸的蒸餾水中,煮沸至透明,冷卻,用蒸餾水定容至100mL,此溶液需當(dāng)天配制。注:可溶性淀粉應(yīng)符合HG3-3095質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。 

2.2.2測定程序 

2.2.2.1待測酶液的制備:稱取酶粉2.0000g(或1.00mL酶液),倒入50mL燒杯中,用少量的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH4.6)溶解,并用玻璃棒搗碎,將上層清液小心傾入適當(dāng)?shù)娜萘科恐?沉渣再加入少量上述緩沖溶液,如此反復(fù)搗研3~4次,zui后全部移入容量瓶中,用緩沖溶液定容至刻度,搖勻,通過4層紗布過濾。再用濾紙濾清,濾液供測定用。濃縮酶液可直接吸取一定量于容量瓶中,用緩沖溶液稀釋定容至刻度。注:制備酶液時,酶液濃度控制在消耗0.05N*(空白-樣品)的差數(shù)為3~6ml左右(以每毫升酶活力約50~90單位為宜)。 

2.2.2.2測定:于甲、乙兩支50mL比色管中,分別加入2%可溶性淀粉溶液25mL,0.1M乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH4.6)5mL,搖勻。于40±0.2℃的恒溫水浴中預(yù)熱5~10min。在甲管中加入酶制備液2.0mL(酶的總活力約110~170單位)立即記時,搖勻。在此溫度下準(zhǔn)確反應(yīng)1h后,立即在甲、乙兩管各加20%氫氧化鈉溶液0.2mL,搖勻,將兩管取出迅速用水冷卻,并于乙管中補加酶制備液2.0mL(作為對照)取兩管中上述反應(yīng)液各5mL放入碘量瓶中,準(zhǔn)確加入0.1N碘液10mL,再加0.1N氫氧化鈉溶液15mL(邊加邊搖晃),放置暗處15min,加入2N硫酸2mL,用0.05N*溶液滴定至無色為終點。 

2.2.2.3計算1g酶粉或1mL酶液在40℃、pH4.6的條件下,1h分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖的酶量為一個酶活力單位。 

132.2 

X=(A-B)×N×90.05×━━×━━×n………………(1) 

25 

式中:X--酶活力單位,μ/g(mL);A--空白試驗消耗*溶液的毫升數(shù);B--樣品消耗*溶液的毫升數(shù);N--*溶液的當(dāng)量濃度;n--稀釋倍數(shù);90.05--1mL1N*相當(dāng)葡萄糖毫克數(shù);1/2--折算成1mL酶液的量;32.2--反應(yīng)液總體積,毫升數(shù);5--吸取反應(yīng)液的毫升數(shù)。為計算方便,可按稀釋倍數(shù)參考表計算,系數(shù)乘以滴定空白和樣品所消耗0.05N*溶液的差值(A-B)為酶活力單位。稀釋倍數(shù)參考表2。 

表2 稀釋倍數(shù)參考表 

稀釋倍數(shù) 系數(shù) 稀釋倍數(shù) 系數(shù) 

原數(shù) 14.5 35 507.5 

2 29 40 580 

5 72.5 45 625.5 

1014550725 

15 217.5 100 1450 

20 290 200 2900 

25 362.5 250 3625 

30 435 

2.3 水分 

2.3.1 測定程序于已知恒重的40mm×25mm稱量皿中,稱取酶粉約2.0000g,在105~110℃恒溫干燥箱內(nèi)烘2h,移至干燥器中冷卻,稱重,再在干燥箱內(nèi)烘干,直至恒重。 

2.3.2 計算 

W1-W2 

X1=━━━━×100………………………………………(2) 

W1-W 

式中:X1--樣品中水分的含量,%;W--稱量皿質(zhì)量,g;W1--烘干前皿加樣品質(zhì)量,g;W2--烘干后皿加樣品質(zhì)量,g。 

2.4 細(xì)度 

2.4.1 測定程序稱取100g酶粉用40目標(biāo)準(zhǔn)分樣篩(銅網(wǎng))篩分,稱其未通過的酶粉質(zhì)量。 

2.4.2 計算 

M-m 

X2=━━━━×100………………………………………(3) 



式中:X2--酶粉樣品細(xì)度,%;M--原酶粉質(zhì)量,g;m--篩后留存酶粉質(zhì)量,g。 

2.5 酶活力保存率 

E1 

X3=━━━━×100………………………………………(4) 



式中:X3--酶活力保存率,%;E--原酶粉(液)活力;E1--檢測酶活力。 

2.6 重金屬 

2.6.1 試劑 

2.6.1.1 硝酸:分析純。 

2.6.1.2 硫酸:分析純。 

2.6.1.3 鹽酸:分析純。 

2.6.1.3.1 6N鹽酸:量取500mL鹽酸,用蒸餾水稀釋至1000mL。 

2.6.1.3.2 1N鹽酸:量取83mL鹽酸,用蒸餾水稀釋至1000mL。 

2.6.1.4 氨水:分析純。 

2.6.1.4.1 5N氨水:量取333mL氨水,用蒸餾水稀釋至1000mL。 

2.6.1.4.2 1N氨水:量取66mL氨水,用蒸餾水稀釋至1000mL。 

2.6.1.5 pH3.5的乙酸鹽緩沖液:稱取25.0g乙酸銨溶于25mL蒸餾水中,加6N鹽酸45mL,用*或稀氨水調(diào)節(jié)pH至3.5,用蒸餾水稀釋至100mL。 

2.6.1.61%*指示液:按GB603配制。 

2.6.1.7飽和硫化氫水:按GB603配制(此溶液于使用前制備)。 

2.6.1.8鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(每毫升含0.01mg鉛):按GB602配制,臨用前用蒸餾水稀釋10倍。 

2.6.2測定程序 

2.6.2.1樣品處理稱取5.0g樣品置于250mL凱氏燒瓶或三角燒瓶中,加10~15mL硝酸浸潤樣品放置片刻(或過夜)后,緩緩加熱,待作用緩和后稍冷,沿瓶壁加入5mL硫酸再緩緩加熱,至瓶中溶液開始變成棕色,不斷滴加硝酸(如有必要可滴加些高氯酸)至有機(jī)質(zhì)分解*,繼續(xù)加熱,至生成大量的二氧化硫白色煙霧。zui后溶液應(yīng)呈無色或微帶黃色。冷卻后將溶液移入50mL容量瓶中,用水洗滌三角燒瓶,將洗液并入容量瓶中,加蒸餾水至刻度,混勻,每10mL該溶液相當(dāng)于1g樣品。取同樣重的硝酸、硫酸按上述方法作試劑空白試驗。 

2.6.2.2樣品測定 

2.6.2.2.1溶液A:吸取含鉛標(biāo)準(zhǔn)液1mL于50mL納氏比色管中,加水至25mL混勻,加1滴1%*指示液;用*或稀氨水調(diào)節(jié)pH至中性(*紅色褪去)。加入pH3.5的乙酸鹽緩沖液5mL,用蒸餾水稀釋至40mL,混勻備用。 

2.6.2.2.2溶液B:取一支與溶液A所配套的納氏比色管,加入20mL樣品液,加蒸餾水至25mL混勻,加1滴1%*指示液,用*或稀氨水調(diào)節(jié)pH至中性(*紅色褪去),加入pH3.5的乙酸鹽緩沖液5mL,用蒸餾水稀釋至40mL,混勻備用。 

2.6.2.2.3溶液C:取一支與溶液A、B所配套的納氏比色管,加入與溶液B相同量的樣品液,再加入與溶液A相同量的鉛標(biāo)準(zhǔn)液,加蒸餾水至25mL,混勻,加1滴1%*指示液,用*或稀氨水調(diào)節(jié)pH至中性(*紅色剛褪去),加入pH3.5的乙酸鹽緩沖液5mL,用蒸餾水稀釋至40mL,混勻備用。 

2.6.2.2.4向各管中加入10mL新鮮制備的硫化氫飽和液,混勻,放置10min后在白色背景下觀察,溶液B的色度不得深于溶液A的色度,溶液C的色度應(yīng)與溶液A的色度相當(dāng)或深于溶液A的色度。 

2.7鉛按GB5009.12《食品中鉛的測定方法》中的雙硫腙單色法執(zhí)行。樣品處理采用硝酸-硫酸法。 

2.8砷按GB5009.11《食品中總砷的測定方法》中的銀鹽法執(zhí)行。樣品處理采用硝酸-硫酸法。 

2.9黃曲霉毒素B1按GB5009.22《食品中黃曲霉毒素B1的測定方法》執(zhí)行。 

2.*腸菌群按GB4789.3《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群測定》執(zhí)行。 

2.11沙門氏菌按GB4789.3《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》執(zhí)行。 

3檢驗規(guī)則 

3.1產(chǎn)品需經(jīng)生產(chǎn)廠技術(shù)部門檢驗,并簽發(fā)合格證方可出廠。生產(chǎn)廠以每一生產(chǎn)班次或每一罐進(jìn)庫的量為同一批次的產(chǎn)品。 

3.2訂貨單位若需抽樣檢驗,應(yīng)從該酶制劑中提取兩份,按本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的試驗方法進(jìn)行檢驗。若有一個樣品或一項指標(biāo)不符合標(biāo)準(zhǔn)的要求,應(yīng)與生產(chǎn)廠協(xié)商。再取一倍量的同批樣品共同進(jìn)行復(fù)驗,如仍不合格時,則全批產(chǎn)品作為不合格品,退交生產(chǎn)廠處理。若產(chǎn)品經(jīng)復(fù)驗合格,訂貨方應(yīng)承擔(dān)試驗費用。如不合格,應(yīng)由生產(chǎn)廠家承擔(dān)試驗費用。 

4標(biāo)志、包裝、運輸、貯存 

4.1酶制劑的外包裝箱,除注明品名、生產(chǎn)廠名、規(guī)格、注冊商標(biāo)外,還應(yīng)注明食品添加劑。箱里并應(yīng)附有產(chǎn)品檢驗合格證,合格證上印有品名、批號、數(shù)量、規(guī)格、生產(chǎn)日期、檢驗員等。 

4.2內(nèi)包裝為食品用塑料袋,包裝分為2kg、3kg,應(yīng)印有注冊商標(biāo)、產(chǎn)品名稱、規(guī)格、重量、生產(chǎn)廠名。 

4.3本品含有生物活性物質(zhì),對光線、溫度、濕度易引起失活。在運輸途中應(yīng)避免日光曝曬和雨淋。貯存?zhèn)}庫應(yīng)保持清潔、陰涼、干燥、通風(fēng)。 

附加說明: 

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國輕工業(yè)部、衛(wèi)生部提出。 

本標(biāo)準(zhǔn)由輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所、衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所歸口。 

本標(biāo)準(zhǔn)由無錫酶制劑廠、輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所、天津市衛(wèi)生防病中心、無錫市衛(wèi)生防疫站負(fù)責(zé)起草。 
關(guān)鍵詞:干燥箱
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