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任務3糖化酶的分離提取及性質分析

、糖化酶的分離提取

成品糖化酶可分為液體酶和固體酶兩種，固體酶的制備方法可分為鹽析法、有機溶劑沉淀法和吸附法等，采用條合理的提取工藝，可制備系列酶產品以滿足不同行業(yè)的需求及降低成品的成本，具體流程如圖6-13所示。

發(fā)稱被硫續(xù)沉淀1論游液回收i粉停穩(wěn)定劑、防腐劑滋件烘干包裝包裝數(shù)食品）烘干、粘碎揚碎《食品哦工業(yè)）包裝（食品》包裝（工業(yè)）

圖6-13糖化酶固體確提取制備工藝流程

目前內對液體酶產品采用的濃縮方法有兩種，種為依靠熱源來蒸發(fā)產品中的水分，另種為利用滲透膜超濾除去產品中的水分。比較上述兩種方法，前者設備投資大、耗能多；而后者投資少、耗能低，且操作簡單、清洗方便、維修及更換成本低，產品收率高。

滲透膜超濾濃縮方法中，絮凝工藝是提取工藝中關鍵的步，直接決定板框過濾等工序的工作與產品的質量，滲透膜超濾濃縮法流程如圖6-14所示。

發(fā)辭液—絮—板框壓鍵—鍵液蛇餅超密濃絡干燥后作填充劑我飼料防版和標準化處理成品

圖6-14滲透膜超灣濃縮制備液體糖化硫工藝流

根根據(jù)上述過程可知，糖化酶的分離提取主要有以下幾個步驟。

1.酶液的獲得與預處理

固態(tài)培養(yǎng)：取孢子布滿麩曲、酶活力已達高峰的固態(tài)基質，用0.9%的生理鹽水攪拌浸泡1h，4層紗布過濾，濾液于4℃，6000r/min，離心10min，上清液即為粗酶液。

液態(tài)培養(yǎng)：直接取發(fā)酵液于4C下離心、洗滌，上清液經紗布過濾，合并后得到粗醉液。

預處理：由于發(fā)酵所采用的培養(yǎng)基大多含有麩皮等纖維成分，經初步分離所得的粗酶液中大多含有大量不溶性雜質，因此還需要經過絮凝和壓濾的處理，從而大大改善發(fā)酵液的過濾性，提高澄清度。應用作為糖化酶絮凝劑的種類主要有APAM（陰離子案丙烯酰胺）、、硅藻土、硫酸鋅、黃血鹽等，具體加入種類和濃度須經實驗確定。精制濃縮液體糖化酶的生產過程中，絮凝工藝是關鍵的步，如果絮凝效果不好，將導致處理時間長，增加染菌的可能性。

2.碎液的濃縮

經過預處理的粗酶液般糖化酶的濃度較低，不適合工業(yè)化需要，需要進步地濃縮。其方法可采用真空濃縮、酒精沉淀、超濾等。前兩種方法多用于固體酶制劑的制備，超濾多用于液體制劑的制備。

超濾是加壓膜過濾方法的種，其工作原理是在定壓力下把大溶質分子阻留在藤的側（留在原來的溶液中），而小溶質分子透過至膜的另側，從而達到分離純化、濃縮產物的目的。超濾法適用于牛物大分子發(fā)酵產品（如糖化酶、a-）等的提取純化和濃縮。該工藝具有成本低、操作方便、條件溫和、較好地保持酶活力、產品回收率高等該方法的使用過程中，需要根據(jù)產品質量和工藝要求選擇超濾膜、進料口壓力、出料口壓力、進出料口之壓差、操作溫度（不超過40℃）、濃縮倍數(shù)等條件，以達到佳的效果。

運行過程中定時測定超濾液的流及酶活力，以確認超濾器運行是否正常。

同時，李靜等（2010）用雙水相體系[PEG/KH，PO.、PEG/（NH。）：S0，和PEG/

MgSQ.]萃取糖化酶，其中以PEG/（NH。）：SO.雙水相體系在PEG相對分子質量為20000、PEG溶液濃度為28%、（NH。）：SO，溶液濃度為20%時，分配系數(shù)為0.15，萃取效果好，即糖化酶回收率高（96.1%）。

3.酶液的千燥與后處理

如果制作固體酶制劑，將獲得的濃縮液沉淀、離心后，所得酶泥放入干燥箱中40℃熱風干燥，干燥物磨粉后加入防腐劑、穩(wěn)定劑（如、、醋酸鈣等）即得到租酶制劑成品。

而液體醉制劑，只需在濃縮液中加入防腐劑、穩(wěn)定劑即可。

二、糖化酶的性質分析

1.糖化酶活力測定

具體參考本書相關內容。

2.糖化酶性質

籍化酶相對分子質量：瓣化酶是種組合酶，采用離子交換層析法分離純化其各種成分（測定有活性的），收集后，經電泳得到其相對分子質量。

適反應溫度：將適量經層析純化的醇制劑溶于定pH的緩沖液中，在不同溫度下分別測定糖化酶活力，以高酶活力為，繪出反應溫度與酶活力的相關曲線。熱穩(wěn)定性：將適量經層析純化的酶制劑溶于定pH的緩沖液中，在不同溫度下分別保溫不同時間后，測定糖化酶活力，以不經保溫的酶活力為，繪出保溫時間與酶活力的相關曲線。

適pH：將適量經層析純化的制劑溶于不同pH的緩沖液中，在適溫度下分別測定糖化酶活力，以高酶活力為，繪出不同pH與酶活力的相關曲線。

思考題

1.糖化酶的特點有哪些？

2.薪化酶產生菌分離篩選的主要方法流程是怎樣的？

3.糖化醇的實際應用有哪些方面？

4.糖化酶的作用特點與纖維素酶有何異同？

5.產糖化酶真菌與產纖維素酶真菌的培養(yǎng)特點有何異同？