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廣州虹科電子科技有限公司
主營產(chǎn)品： PROFIBUS/PROFINET 通訊網(wǎng)關(guān)，板卡，診斷工具，以及自動化配件，CAN/CANOPEN 接口卡，開發(fā)工具，示波器，記錄儀 |
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2025-6-21 閱讀(9)
微生物定量的常用方法可以大致的分為計數(shù)法和比濁法。計數(shù)法的依據(jù)是通過取部分樣品，稀釋，計數(shù)，之后換算成待測樣品的一種方法。比濁法主要是通過OD值進行反映，具體下文中會講到。這兩種方法很難說優(yōu)劣，其實在實際操作過程中都搭配著使用，相互有各自的適用范圍，使得到的結(jié)果更精確。本篇的講述主要適用于比濁法。
在微生物的定量分析中，通過OD值反映微生物的濃度或數(shù)量是一種常用的方法。很多文章都提到其原理是細菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成正比，與光密度成反比。它的理論依據(jù)為光吸收的基本定理——朗伯比爾定律。
朗伯-比爾定律（Beer-Lambert Law）是光吸收的基本定律，適用于所有的電磁輻射和所有的吸光物質(zhì)，包括氣體、固體、液體、分子、原子和離子。比爾-朗伯定律是比色分析及分光光度法的理論基礎(chǔ)。光被吸收的量正比于光程中產(chǎn)生光吸收的分子數(shù)目。
A=lg(1/T)=Kbc
朗伯-比爾定律成立條件是待測物為均一的稀溶液、氣體等，無溶質(zhì)、溶劑及懸濁物引起的散射。但細菌、細胞等相關(guān)的物質(zhì)并不屬于稀溶液和氣體的范疇。為什么還用OD值反映微生物的濃度呢？
雖然朗伯-比爾定律是一個有限的定律，但一定濃度下，菌懸液可以看成是溶液，將內(nèi)部的細菌當做均一粒子。有諸多文獻表明，在一定范圍濃度內(nèi)，該階段的光密度跟菌體的濃度成正比。
具體來講，細菌菌液不能直接適用于朗伯-比爾定律，只是因為細菌是粒狀的物體，才會跟朗伯-比爾定律的這種方法關(guān)聯(lián)且部分有效。請注意是部分有效。可以把這種方法看成在一些限定條件下的半經(jīng)驗方法，這個限定條件就是微生物處于線性生長期。
類似理想氣體狀態(tài)方程雖然有諸多的限制條件，但若在誤差的允許范圍內(nèi)，也是可以用來估算氣體狀態(tài)的。
由以上可知，微生物的定量分析并不是像我們想的那樣，把試管一放，儀器一按，就可以得到答案的。下面就為您解答，當拿到一份未知濃度的細菌培養(yǎng)液時，怎樣用OD值來進行定量分析。
（1）怎樣選的波長？
答：一般都采用550-650，其實如果波長一定的話，即之后做標準曲線也是當時測量的波長的話，基本沒什么影響。
（2）如果菌液超出該菌種濃度的適用范圍呢？
答：可以稀釋。同行們有個0.2-0.7的說法，但具體如何，感覺也和微生物種類有很大關(guān)系。反正如果太濃的話，一定要稀釋就對了。
（3）測完OD值，你就知道該菌液的微生物數(shù)量了？
答：還沒有。還存在2個問題：
①測量OD值的結(jié)果反映一般只是總菌數(shù)。在對數(shù)生長期時，OD值和活菌數(shù)呈現(xiàn)一定的線性關(guān)系，但穩(wěn)定期時，細菌的一部分在生長，一部分已經(jīng)死亡，此時反映的只能是總菌數(shù)的增多，但活菌數(shù)卻無法反映。
②當菌體較為規(guī)則，菌群分布較為均勻，干擾OD測量的因素較少，但對于菌體過大或絲狀菌體懸液，如絲狀真菌，則會因為分布均勻度及折射反射影響光吸收等問題導致測量結(jié)果不準確。
解決方案：一般行業(yè)中，有估算1 OD=10^8 cells/ml。但是還需要結(jié)合具體的菌種，這里推薦方法是可以提前測量一下該菌種的標準曲線或得到一個相關(guān)的方程式。橫坐標是OD值，縱坐標是該微生物較的計數(shù)指標，采用顯微鏡計數(shù)、涂板菌落計數(shù)等，或者流式細胞儀都可以，然后你進行換算即可得到菌液的微生物數(shù)量了。
麥氏乳膠標準校準液用于質(zhì)量控制程序中，以調(diào)整用于鑒定和敏感性測試的細菌懸液的密度。
